课题来源与背景：白癜风(Vitiligo)是常见的后天获得性白斑病,典型特征为表皮黑素细胞缺失引起的皮肤片状白斑。逆转白癜风的色素脱失需要通过紫外线或/和药物激活毛囊和表皮的黑素细胞前体细胞。窄谱紫外线(NBUVB)照射为公认的治疗白癜风的有效方法,经治疗后白斑的色素重获方式为毛囊周围点状复色。本研究拟采用人体正常皮肤、未经治疗和经NBUVB治疗的白癜风患者的皮肤活组织为模型,联合荧光免疫染色技术,评估经紫外线照射激活的黑素细胞形成过程中成熟度不同的基因 (PAX3, TYR, DCT, KIT) 表达,及TYR/MCAM和TYR/KI-67共表达的荧光显色,分析NBUVB照射治疗的白癜风皮损及其他标本表皮及毛囊不同部位的黑素前体细胞的增殖、迁移至分化为黑素细胞的规律和能力。深入理解黑素前体细胞发育、移行及分化的调控机制,为色素缺失性疾病的治疗寻找新的可能作用靶点,研发新的治疗方法。 技术原理及性能指标：(1)人体组织毛囊不同部位横断面免疫组化标本的制备。需制备人体正常皮肤、经NBUVB照射3月、6月的皮损及未经治疗的白癜风皮损三种标本,不同类型标本均需对毛囊漏斗部、毛凸、毛球等不同部位进行免疫组化制备。(2)多种标志物如抗DCT/MCAM/KI-67及抗TYR /MCAM/KI-67共表达的荧光显色技术。(3)利用荧光激光捕获显微切割技术捕获经NBUVB照射治疗的白癜风皮损表皮及毛囊冰冻切片中100个黑素细胞,切片需迅速使用鼠标单克隆抗体NKI-beteb行免疫组化,总RNA提取后设计引物行实时定量PCR (qRT-PCR)。 技术的创新性与先进性：研究方向紧靠目前研究热点。目前研究认为,自噬在白癜风的发病中占有的重要地位,本就研究通过实验剂量下,NB-UVB处理后p-AMPK表达水平改变及p-mTOR的表达水平变化,进一步显示LC3 II/I及P62蛋白水平的表达变化,观察接受UVB的表皮细胞中自噬反应的增强。与既往发表文献一致。 选择与临床息息相关的热点问题,利于临床转化。目前NB-UVB的临床疗效得到了明确,但是具体治疗方案仍然存在一定争议。既往不同学者报道差异较大。本研究通过患者皮损处黑素细胞进行体外培养。所有样本均分别接受不同的辐射剂量UVB照射处理,并分别在辐射后2d、3d、4d采用MTT法对黑素细胞的增殖活性进行测定及黑素含量测定。结果显示NB-UVB对黑素细胞增殖的诱导作用呈现...
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