目的探讨选择性脑亚低温对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠p300及乳酸化修饰的影响。方法选取60只6～8周龄SPF级健康雄性SD大鼠, 采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、CIRI组、选择性脑亚低温干预组(CIRI+HT组)和常温处理组(CIRI+NT组), 每组15只。采用线栓法构建大脑中动脉闭塞, 缺血2 h后撤栓实现再灌注;Sham组仅实施颈部血管暴露手术。于再灌注即刻, 通过左侧颈内动脉插管, 以0.6 mL/min的速度分别灌注20 ℃(CIRI+HT组)或37 ℃(CIRI+NT组)生理盐水, 持续10 min。在整个过程中监测大鼠的脑温及直肠温度, 于再灌注后24 h, 采用改良神经功能缺损评分(mNSS)对大鼠神经功能进行评估。随后处死大鼠, 迅速取脑组织, 经2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死情况, 并计算脑梗死体积百分比;取缺血半暗带区脑皮质, 用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况;经苏木素-伊红(HE)染色观察神经细胞形态学改变;免疫荧光染色法观察p300表达情况;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测乳酸化修饰和p300蛋白表达;同时检测缺血半暗带区脑皮质乳酸水平。结果与Sham组比较, CIRI组、CIRI+HT组、CIRI+NT组mNSS、脑梗死体积、神经细胞凋亡率、乳酸含量、乳酸化修饰和p300表达均升高(均P<0.05)。与CIRI组比较, CIRI+HT组mNSS、脑梗死体积、神经细胞凋亡率, 以及缺血脑组织乳酸含量、乳酸化修饰和p300表达降低〔mNSS(分):4.20±1.30比9.40±1.34, 脑梗死体积百分比:(31.21±1.20)%比(41.18±2.33)%, 神经细胞凋亡率:(27.69±2.87)%比(48.90±2.08)%, 乳酸含量(mmol/g):0.44±0.04比0.63±0.04, 乳酸化修饰(乳酸化修饰/β-actin):0.29±0.03比0.36±0.03, p300表达(p300/β-actin):0.60±0.02比0.82±0.02, p300阳性细胞比例:(46.70±2.97)%比(63.80±3.41)%, 均P0.05)。HE染色显示, Sham组神经细胞形态完整且轮廓清晰;CIRI组和CIRI+NT组可见大量细胞水肿, 细胞核不规则固缩;CIRI+HT组细胞核固缩情况减轻, 神经细胞形态改变减轻。结论选择性脑亚低温可减轻大鼠CIRI, 其机制可能与减少乳酸生成, 抑制p300表达, 进而抑制乳酸化修饰有关。
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